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工作原理:
本产品采用层析式双抗体夹心法检测Cas12/13的标记探针。用户仅需在探针设计时将一端标记生物素(Biotin),另一端标记异硫氰酸荧光素(FITC)或6-羧基荧光素(6-FAM),即可使用本产品检测目的基因LAMP、RAA或RPA等温扩增后的Cas酶切产物。
预期用途:
核酸扩增产物的检测。
包装规格/货号:
包装规格:10条/包×5,铝箔袋防潮包装。
图1. 一次性核酸检测试纸条结构示意图
储存条件及有效期:
储存条件:存放于避光干燥处,储存温度4~30℃。
有效期:12个月。
操作步骤:
1. 根据检测样品数量取出相应数量的试纸条,并在吸收垫(图1)上做好标记。每根试纸条只能用于单次、单个样品的检测。扩增产物体积为50~100µL时,可直接在200µL PCR反应管中检测核酸产物,产物体积不足50µL时,需在PCR管内加超纯水补足体积至50µL,吸打混匀后,才能进行检测。
2. PCR、RPA或RAA反应结束后,打开PCR反应管,将试纸条结合垫端(箭头端)插入PCR反应管(图1),液面不得超过结合垫最上端,待判读区全部浸润(约需1~2min,外界环境温度较低时,如冬季,会降低吸水速度,判读区浸润时间将会延长),待质控线(C线)显色后,可以将试纸条拿出。根据试纸条显色情况直接读取检测结果。
3. 质控线(T线)显色后10min内观察结果,10min后判读无效。
4. 记录检测结果,将试纸条密封丢弃在安全处。
结果判读:
图2. Cas12/13专用核酸检测试纸条结果判读示意图
1. 阳性(+):
试纸条质控线(C线)和检测线(T线)均出现红色条带;试纸条质控线(C线)不显色,检测线(T线)出现红色条带。上述两种情况均说明Cas12/13可进行有效切割,并激活报告基团显色,结果均可判定为阳性。
2. 阴性(-):
试纸条质控线(C线)出现一条红色条带,检测线(T线)不显色,判定为阴性结果。该结果表明Cas12/13未能切割报告分子,未能激活报告基团显色。
3. 无效:
试纸条质控线(C线)和检测线(T线)均未出现条带,提示所用的试纸条或扩增试剂可能已经损坏、失效或操作有误。此时,应仔细阅读说明书,重新扩增和检测。如果问题仍然存在,应立即停止使用同一批号的产品,并与当地供应商联系。
注意事项及安全提示:
1. 本产品应结合探针使用,如探针合成纯度不足,即探针含游离的Biotin或者游离的FITC时,会导致以超纯水作阴性对照的切割产物T线显红色,即阴性对照呈现假阳性结果。
2. 本产品可用于探针合成质量的检测。调整空白阴性对照中探针的使用浓度至200 nM,并进行切割反应。当试纸条结合垫端浸入Cas12/Cas13切割产物后的5~7 min内,试纸条T线显红色,即说明探针纯度难以满足实验要求,会因探针纯度不足导致假阳性结果。建议更换探针合成供应商,并重新合成探针。本产品在探针使用浓度为20~50nM的情况下,试纸条结合垫端浸入Cas12/Cas13切割产物后的30 min内,T线均不会显色。
3. 本产品仅供科研使用。使用前请仔细阅读说明书,严格按照说明书操作。违反或者未按说明书进行操作可能导致错误结果。
4. 产品应依照说明书要求,储存于合适的环境和温度下,并在有效期内使用。储存不当或产品过期可能导致错误结果。打开包装后请尽快使用试纸条,以免因试纸条受潮影响试验结果。检测环境光线不足,操作者色弱等因素均可能导致错误结果。
5. 使用完毕后,应尽快将纸条装进密封袋,妥善处理。本产品为一次性使用产品,请勿重复使用。
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