为什么Cas9大热？
CRISPR/Cas9目前热点CRISPR/Cas9有个极大的优势就是可以改造为切口酶，在DNA的特定位置制造单链切口，这样不会引起非同源末端连接，但是可以激活同源细胞的重组。
这套系统目前的主要用途是在以下几个方面：基因定点InDel突变基因定点敲入两位点同时突变小片段的缺失编码基因和非编码基因（lncRNA、microRNA）的靶向基因敲除 此套系统的风靡应该是在2012年，将此系统应用于基因治疗，对人类的遗传病、肿瘤、癌症的治疗有所贡献。
CRISPR/Cas9的切割是通过gRNA与基因组位置之间20bp碱基的配对，且配对碱基的5′端需要有PAM结构(NGG)，再引导Cas9作用实现的，目前的由于脱靶效应使其应用有所限制。现在大家在gRNA序列的选择上已经经验值满满，各种打分算法都已经出来了，但是再怎么优化gRNA，也难以控制genome-wide off target。现在很多团队已经把目光投向Cas9蛋白本身，尝试通过点突变提高精确性，而且已经做出了不错的成果
